【Nature Neuroscience】抑癌染色体肚子里模块建立新最好的办法：AAV CRISPR突然变化库！

胶质母细胞系瘤（Glioblastoma multiforme）是脑癌中自杀率最底和最先见的一款，是除脑干胶质瘤外生存率原因最不开朗的神经末梢周围神经末梢系统软件癌症晚期。

雪上加霜的是，目前的所有治疗手段都无法治愈胶质母细胞瘤患者，患者的中位生存期仅有12.2-18.2个月。因此，全世界的科学家、医生都在努力检测和治疗这种恶性疾病。
在基因检测层面，人们对胶质母细胞瘤患者进行的基因图谱分析发现了223个基因中的453个突变位点，并最终找出71个显著突变基因（SMGs）。然而，大量新发现的基因功能从未被解读，特别是这些基因在胶质母细胞瘤中的作用尚不清楚。

而由于不同患者个体中的基因突变组合不同，我们难以解释复杂的突变与疾病的因果关系，也造成胶质母细胞瘤患者病程的差异化及抗药性的不同。
因此，我们需要对胶质母细胞瘤进行深入的基因功能分析和表型定量测定，这对于治疗该疾病至关重要。但是，目前没有任何一项研究能够给出结论，说明在患者中发现的某些突变基因能够驱动正常细胞转化为胶质母细胞瘤。

第一周一，来耶鲁专科大学医疗院的华裔科学研究家Sidi Chen与卷心菜巴塞尔的Randall J Platt讲解，及CRISPR域大牛小牛张锋讲解合伙，在Nature Neuroscience投稿了新出作业[1]。他也是借助AAV蠕虫病毒承载介导的在体CRISPR复印机扫描方法，在完完全全天然免疫可溶性的小鼠脑中，运用收集测序途径加载突然变化统计资料和转录酚类化合物析等多方法，完美地挑选了一大系列表会造成脑胶质母上皮细胞瘤突发的关键所在表观遗传突然变化。 银河集团官网 生物 一直关注肿瘤研究领域的重大研究进展，为科研工作者提供优质的病毒工具和整体解决方案，助力临床转化和基因治疗！
实验结果与结论：

1. 脑定位注射AAV-CRISPR库诱导胶质母细胞瘤的产生

为了更好地在小鼠脑中会在线检测胶质母受损体细胞瘤想关的正相关突变性染色体功能模块，作著发掘好几个套对于AAV平台和CRISPR技术水平的在体扫描仪方案，会在小鼠脑原位创建胶质母受损体细胞瘤三维模型（图1）。
图1 AAV-CRISPR选择手段 在将抑癌染色体（mTSG）库（该库包括对Trp53的sgRNA，应用于加速小鼠策划 的肿癌发生的，亦包括许多的更为明星甲基化染色体靶点sgRNA）针剂到脑中，积极配合MRI复印机扫描，做者出来针剂mTSG库的家禽界明星出来了肿癌，且家禽界的求生存周期长亦明星变低（图2）。这代表AAV-CRISPR方法是可以在小鼠身体内诱骗肿癌的导致。 图2 针剂mTSG变化库的小鼠脑中 很大冒出了癌症 2. AAV-mTSG注射的小鼠脑肿瘤展现了胶质母细胞瘤的特点
依据天然免疫组化调查，作家显示AAV-mTSG注入的小鼠主产生的癌肿相对明星，其基本共同点与我们人类胶质母良性肿瘤細胞瘤提高的癌肿基本共同点相对像，提示信息AAV-mTSG成功的 引诱了胶质母良性肿瘤細胞瘤整治（图3）。
图3 AAV-mTSG注入的小鼠脑淋巴肿瘤能够 了胶质母体细胞瘤的表现 3. 靶向测序手段筛选到多个胶质母细胞瘤突变基因
建设方案建模方法的效果就是：发现肺部肿瘤引发的核心团伙靶点，要为完成此效果，笔者使用靶向治疗想要高效率的获取到测序（Targeted-capture sequencing）的途径，在AAV-mTSG鼠的脑中挑选达到若干个变异什么是基因（图4）。
图4 运用对sgRNA的靶向药物测序途径淘汰到的很多胶质母组织细胞瘤关健染色体变化 用恶性良性肿瘤图谱了解，甚至与耶鲁读书胶质瘤体组织细胞库的筛选，我了解了变化人类基因遗传的职能，我灵魂存在AAV-CRISPR平台搭建的原位胶质母体组织细胞瘤小鼠建模方法就能化学发光法挖掘的关键的良性肿瘤抑癌人类基因遗传靶点（图5）。
图5 肺癌图谱定性分析癌症发现的要点突变率人类基因 4. 并发突变分析（Co-mutation）发现高频并发基因
实现连接数变动阐述，著者从累计1540对风险变动dna中挑选到76对具特殊意议的变动dna，且哪些dna也直接在人胶质母細胞瘤病号脑中形成双方变动（图6），举例说明RB1和TP53, PTEN和RB1, RASA1和STK11等双方变动。 图6 潜在染色体变异性分析一下找到了并且染色体变异性的关键点染色体 5. sgRNA Minipool技术验证突变靶点
下面来，著者运用sgRNA迷你型遗传人类基因遗传遗传人类基因遗传甲基化库检则埋下伏笔会看见的高代表英语性遗传人类基因遗传遗传人类基因遗传甲基化遗传人类基因遗传或共同体遗传人类基因遗传遗传人类基因遗传甲基化遗传人类基因遗传的用途，攻略右图7a，会看见多或多对遗传人类基因遗传遗传人类基因遗传甲基化遗传人类基因遗传却是能够诱惑胶质母神经元瘤的导致（图7）。 图7 sgRNA Minipool方法核实变化靶点的有害 6. 转录组分析胶质母细胞瘤不同突变细胞的转录特性
凭借对各种于甲基化什么是表观遗传促使的胶质母内部膜瘤实现mRNA测序，作家技术鉴定了各种于甲基化内部膜的转录性（图8）。随后，凭借对比Rb1和Nf1甲基化内部膜，作家出现 了616个和986个在Rb1内部膜和Nf1内部膜高体现的什么是表观遗传（图8b）。凭借很多的定性分析，涉及各自甲基化，自己出现 Mll3甲基化会清晰关系Nf1甲基化内部膜的转录组体现，而Zc3h13什么是表观遗传甲基化则会清晰关系Rb1甲基化内部膜的体现。
图8 转录成分析各个甲基化上皮细胞的什么是基因表达爱环境 7. 转录组分析与化学疗法耐药性
结尾处，作著结构设计了口服药中药治疗的RNA测序實驗（图9），后果找到Rb1变异的胶质瘤内部中Zc3h13或PtenDNA变异会延长TMZ肿瘤化疗口服药的抗药力力性，这温馨提示未来的的癌病还要要考虑到有差异 变异DNA的抗药力力性话题。
图9 转录组学剖析得知抗药基因遗传突然变化 总结：
灵活运用AAV病毒感染形式，选用CRISPR表观遗传企业技木，创作者共建打了个套颇具特色化的里面抑癌表观遗传挑选攻略，为素肝癌变异表观遗传的挑选带来了新的土办法。企业恭祝Chen教学的最佳工做顺利进行发布，也希望素有很多的隆重挖掘是可以的帮助人类进化抗击肝癌。 参考文献：
[1] Chow RD, Guzman CD, Wang G, Schmidt F, Youngblood MW, Ye L, et al. AAV-mediated direct in vivo CRISPR screen identifies functional suppressors in glioblastoma. Nature neuroscience. 2017.