近期，山东大学李新钢和王剑教授的脑科学团队在Theranostics杂志上发表题为Targeting the splicing factor NONO inhibits GBM progression through GPX1 intron retention的文章，研究揭示了剪接因子NONO在GBM进展中的作用，以及靶向剪接因子来治疗GBM的可能性。
结果
01 剪接因子NONO在GBM中高表达
的研究实现公开的的TCGA数据文件库，在有mRNA剪接功能表的35几个球蛋白中重置制疗GBM的意向靶点剪接系数NONO。NONO在GBM中表示显著性低过顺利脑细胞性，且其表示量与WHO癌症的等级分类一些。免疫系统荧光毕竟展现NONO的核算位与它剪接系数的效应相完全一致。一体化分享表示NONO在GBM中高表示暗示着着继发性较强（图1）。
图1 剪接因子NONO在胶质瘤中表达上调并与肿瘤分级相关
02 剪接因子NONO影响GBM的生长
要判别NONO在GBM会出现中的不确定性用处，调查技术人员依据siRNA和shRNA敲除人体神经元膜中的NONO。身体外研究说明NONO的找不到会产生GBM人体神经元膜系（U251）和GBM糖尿病患者收入的原代人体神经元膜（P3）繁殖缩短，迁入与侵入作用调低，并人体神经元膜会出现凋亡。在小鼠身体内部原位异种囊胚冻胚移植U251-和P3-shNONO/NC人体神经元膜，过程查看会发现，囊胚冻胚移植shNONO的人体神经元膜滋生取得调低，人体神经元膜繁殖缩短，且荷瘤小鼠的总长期生存期持续拉长。与此同时所写，NONO的受损压制脑胶质瘤繁殖，使得人体神经元膜凋亡，进一个步骤压制了GBM侵入和自自动更新（图2）。
图2 敲除NONO可抑制GBM细胞系的增殖和侵袭，促进细胞凋亡
进一次采取慢艾滋病毒引入不稳定性过展示NONO的LN229和P3体细胞膜。CCK8、EdU、克隆构成、迁徙和肉瘤样癌等身体外科学试验表面，NONO过展示提高LN229和P3体细胞膜的成长和肉瘤样癌。除外，在自身过展示NONO提高LN229-和P3异种植入瘤的成长，并差异性不但缩减小鼠的野外生存期（图3）。
图3 NONO过表达促进GBM的增殖和侵袭
03 剪接因子NONO通过与PSPC1相互作用介导GPX1剪接
为着探秘NONO参与到GBM会发生的系统，钻研者对U251和P3-siNONO/NC内部实施了高通骁龙量RNA-seq阐述。結果信息显示，NONO会不良干扰内部中拥有子-外显子接触的局部剪接速度，并在TCGA资料资料库GBM形容资料资料中加大力度一个脚印冻结并阐述到GPX1和CCN1的形容质量、剪接速度减退的环境。結果证实，NONO介导了GPX1和CCN1的拥有子剪接，不良干扰新风系统在蛋白酶质量的形容。NONO的异常影响GPX1和CCN1基因遗传在mRNA质量取得降底，但pre-mRNA质量稳定发生变化或略显提高。下一点結果认证了NONO立即紧密联系pre-mRNA中的拥有子来介导GPX1和CCN1的剪接在于早熟的mRNA，这样在内部核中探究到GPX1的pre-mRNA与NONO的共导航定位想象。这样，钻研者将加大力度一个脚印探秘GPX1在NONO上下游的功用（图4）。
图4 GPX1和CCN1的表达受NONO介导的pre-mRNA剪接调控
GPX1是我们身体偏重要的抗脱色酶之六，可崔化过脱色氢与谷胱甘肽反响，维系脱色展现稳定。论述工作人员针对RNA-seq数剧使用了GO生物富集分析一下，NONO的敲除与诱导性灵亲水性氧的反响相关的。组织细胞核层次NONO被敲除后，GPX灵亲水性被显著性克制、ROS层次增高，脱色展现稳定平衡、线粒体灵亲水性较低。补救科学试验单位证明，确认GPX1的过体现就可以环节处理GBM组织细胞核系中由NONO敲除必带来的无良作用（图5）。
图5 NONO的丢失通过GPX1途径引起氧化还原失衡
随即NONO各架构域在介导GPX1形容出来过程中中的用途后果了理论学术探析的好奇心，关键在于对NONO血清3个架构域（RRM1、RRM2、DBHS）分别为来进行突变的，建设NONO-wt与3个NONO-mut的U251神经元。最终提示 只能RRM1-mut对GPX1 mRNA的形容出来无明星后果，而RRM2-和DBHS-mut的神经元朝气更为明显消减，且RRM2架构域是NONO与pre-mRNA整合所必备的。方便切实骤理论探析DBHS-mut神经元朝气消减的原由，在CoIP深入分析，最终核实了PSPC1与NONO的DBHS架构域互相用途，因此PSPC1在NONO介导的GPX1剪接住程中中是必备的（图6）。
图6 PSPC1协助NONO的RRM2结构域与GPX1 pre-mRNA结合并进行剪接
04 Auranofin，是一种治疗GBM的潜在分子药物
FDA提出申请的的治疗类风湿骨痛环节炎的用药Auranofin曾有关资料体现了着治癌活性酶，也被得知可能遏制GBM中的GPX1。是，的学者实行了离体SPR讲解，得知Auranofin和NONO可能直接的根据从而体现了着最大的吸引力。内部膜耐药性实验室设计证明信Auranofin根据下跌NONO和GPX1的转录与表明特喜欢的人影晌GBM良性良性癌症内部膜风采，且Auranofin对GPX1的遏制是由NONO所介导，带动内部膜凋亡，导致线粒体作用下跌，从而就能遏制GBM内部膜的外侵。来源于离体实验室的结论，在裸鼠机体确立P3原位异种人授瘤，Auranofin正相关遏制良性良性癌症生長，拉长良性良性癌症承受各种动物的能期。异种人授组织安排病症结论表明NONO和GPX1表明减少，内部膜增值能力减少（图7）。
图7 Auranofin通过NONO-GPX1途径抑制GBM
结论
该研究通过对正常细胞系、癌症细胞系以及原代细胞中的NONO等基因进行干扰/过表达（慢病毒）。通过体内体外实验证明了剪接因子NONO的过表达（慢病毒）促进了GBM的进展，而抑制NONO（慢病毒、shRNA）会导致GPX1中内含子的保留，进而导致ROS增加，细胞凋亡和侵袭抑制。此外，Auranofin可能通过靶向NONO介导的GPX1剪接表现出抗癌活性，Auranofin可能成为GBM患者的一种新的治疗药物，成为一种新的治疗策略。
山东大学齐鲁医院李新钢教授、王剑教授和陈安静研究员为本文的共同通讯作者，课题组博士研究生王旭为论文第一作者，山东大学齐鲁医院为第一作者单位和通讯作者单位。
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