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银河集团官网 双11•科研课题不错过 | 双萤光素酶监测實驗——规则钻研的重要利器

时长:2021-11-04 点击率:

 

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双萤光素酶报告书软件介召

双萤光素酶检则实验设计中的双萤光素酶蕴含哪几种,种是是通知单表观遗传的萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase简称F-Luc),另个种是看做内参的海肾萤光素酶(Renilla luciferase缩写R-Luc),多种萤光素酶的底物和辅上皮组织各种。F-Luc必须要萤光素、O2瓶、ATP、镁亚铁离子等,会亮颜色搭配黄红色,光波可见光波长550-570nm;R-Luc仅必须要腔肠素和O2瓶,光波可见光波长480nm。在上皮组织行同时抒发出F-Luc和R-Luc,F-Luc当做通知单dna生理反应目地dna抒发出的优化,R-Luc当做内参dna,为测试打造一国家标准线(少在于变现关键因素如培养出上皮组织的流通量,上皮组织转染和裂解的学习效率对實驗合理性的影响力)。所形成的通知单软件很广用做靶dna安全验证和再启动子活性酶类的分析。

 

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应用软件的介绍

●靶基因遗传验正

miRNA关键能够 角色于靶什么是dna组遗传的3’UTR起角色(光降解或克制反译),将目地什么是dna组遗传3’UTR(天然的型和实现位点突变性型)字段实现至平台中该报告格式什么是dna组遗传F-Luc的3’端,能够 很过呈现miRNA后,该报告格式什么是dna组遗传呈现的变动(萤光素酶的几丁质酶减退或是不改变),来判断miRNA与靶什么是dna组遗传3’UTR的角色位点。

●通电子特异性设计

转录要素核心按照用于靶DNA的加载子起用,将主要目的DNA加载子区队列代替通知单DNAF-Luc的加载子,按照共表答转录要素后,通知单DNA表答的修改,来确实转录要素与靶DNA加载子依照位点及对靶DNA的用。

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技術的路线

表明研究规划为的规划研究规划设计方案—预測联系位点--创造出一个天然的/变动数据人类基因膜蛋白模式---共转染细胞核---在线检测酶活
 

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典型用途目标个人小结

● 手机验证miRNA同mRNA靶向治疗互作。将靶mRNA的3’UTR字段进到这一领域意见书DNA质粒载体,再共转户该miRNA,比如萤光素酶可溶性回落,则显示系统为其靶字段。 

● 验证miRNA同circRNA靶向互作。将circRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域,检测萤光素酶活性。 

● 验证miRNA同lncRNA靶向互作。将lncRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域,检测萤光素酶活性。

● 启动子活性分析。将启动子区域序列进行分段截短,再分别构建入报告基因载体,检测其启动子活性。

● 验证特定转录因子同启动子的作用。将启动子区域插入报告基因载体,同时在实验细胞中共转该转录因子,分析转录因子过表达是否提高萤光素酶活性。 

● 分析信号通路是否激活。将该信号通路的下游响应原件序列构建入报告基因载体,在不同上游信号条件下,萤光素酶活性代表了通路的下游响应。

 

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