生产工具质粒解绍
| 表达系统 | 真核表达载体 | 慢病毒载体 | 重组腺相关病毒载体 | 重组腺病毒载体 |
|---|---|---|---|---|
| 载体基因特性 | 双链DNA质粒 | RNA逆转录病毒 | 单链DNA病毒 | 双链DNA病毒 |
| 外源基因表达时间 | 24h开始表达,持续3-7天 | 2-4天开始表达,长时间稳定表达 | 7-14天开始表达 | 1-2天开始表达 |
| 插入片段大小 | 8kb左右 | 4kb左右 | 2.8kb左右 | 6kb左右 |
| 稳定细胞株筛选 | 难操作 | 可以 | 不可以 | 不可以,瞬时表达 |
| 细胞实验 | 细胞系,部分转染效率低 | 首选,广谱,感染效率高 | 不适合 | 广谱,感染效率高 |
| 动物实验 | 不适合 | 适合,根据观察时间和注射部位 | 首选,根据观察时间和注射部位 | 免疫原性高,慎选 |
| 滴度范围 | 无 | 108~109TU/ml | 1012-1013vg/ml | 1010-1011pfu/ml |
质粒载体图谱上常见开关元件价绍
| 元件名称 | 类型 | 用途 |
|---|---|---|
| 启动子 | CMV、CAG、EF1a、U6等 | 广谱或特异启动目的基因的表达 |
| hSyn、CaMKIIα等 | 特异性启动子,在特定的组织细胞中启动目的基因的表达 | |
| 蛋白标签 | 3xFLAG、HA 、6xHis、Myc等 | 与目的基因融合表达,常用于检测外源蛋白表达水平 |
| 荧光标示 | EGFP、mCherry、mNeonGreen等 | 可与作用什么是基因深度相融合或者非深度相融合展示在检查测量转染、妇科感染效率 |
| 抗性基因 | Puro、Neo、Hygro、BSD等 | 真核抗性,常用于稳定株筛选 |
| Amp、Kan | 原核抗性,可用于原核菌培植,质粒PCR扩增 | |
| 连接元件 | Linker | 广泛用于连接方式两大人类基因,凝固传达会时常用,可有效降低因凝固传达对核蛋白折叠型和用途的影响到 |
| IRES、2A | 使用于接触5个基因组,起到非相结合展现的作用 | |
| 其它元件 | WPRE | 增加目的基因的表达 |
形式会选择(部件)
| 载体类别 | 编号 | 载体元件 |
|---|---|---|
| 慢病毒过表达 | GL127 | pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE |
| GL121 | pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE | |
| GL107 | pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE | |
| GL122 | pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE | |
| GL124 | pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE | |
| 腺病毒过表达 | H225 | pADV-mCMV-MCS-3xFLAG |
| H201 | pADV-mCMV-EGFP-3xFLAG | |
| H213 | pADV-mCMV-3xFLAG-EGFP | |
| H204 | pADV-mCMV-mCherry-HA | |
| 腺相关病毒过表达 | AOV024 | pAAV-CMV-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE |
| AOV025 | pAAV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE | |
| AOV064 | pAAV-hSyn-EGFP-P2A-3xFLAG-WPRE | |
| AOV065 | AAV-hSyn-mCherry-P2A-3xFLAG-WPRE | |
| H9429 | pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA | |
| H9525 | pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA | |
| H10881 | pAAV-CAG-EGFP-3xFLAG-tWPA | |
| H10886 | pAAV-CMV-EGFP-3xFLAG-tWPA |
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