外泌体靶向药物递送|胶质母细胞核瘤的反义寡核苷酸缓解

胶质母受损细胞核瘤是最绝命的原发性脑癌，病号的平均值生命过高一年，不过5%的病号能活到5年上。胶质母受损细胞核瘤的的标准缓解是做做手术割掉后用以放疗和替莫唑胺（TMZ）化疗药，但有长时间做做手术缓解是有限责任的，且还包括TMZ少部分的基本都数用量都存在特别严重的毒素和副效应，故近期什么是基因缓解的探索被越来越大了解。

MicroRNA-21（miR-21）是包括胶质母细胞瘤在内的实体肿瘤中上调最高的miRNAs之一，下调miR-21可作为一种干预肿瘤细胞增殖和增加凋亡的方法。细胞外囊泡（EVs）是一种膜源性囊泡，由不同种细胞分泌，参与细胞间的信号传导。本篇文章中作者通过生成靶向胶质母细胞瘤的外泌体（T7-exo），经系统注射将T7-exo与脑部的胶质母细胞瘤结合，提高miRNA-21反义寡核苷酸（AMO-21）的递送效率。因此，T7-exo被认为是AMO-21靶向胶质母细胞瘤的有效载体。

Fig.1 外泌体作用示意图
 

Result

1.RVG-和 T7-exo修饰及装载AMO-21的外泌体特性

诗人分辨将含RVG-Lamp2b和T7-Lamp2b质粒转染入293T受损细胞，拆分外泌体后再按照WB检验得出的RVG-exo和T7-exo都有点靶向治疗配体。紧接着按照电转将AMO-21包入RVG-exo和T7-exo中，实验性找到，AMO-21包入外泌体后对其深浅是没凸显直接影响。此外，用打印光电子体视显微镜（SEM）洞察分析外泌体在配体突显后和AMO-21垃圾装载后的要素是没不错差别的（Fig.1-2）。

Fig.2 RVG-和 T7-exo修饰外泌体及装载AMO-21的外泌体特性观察

2.T7-exo装载AMO-21的体外传递效率

用FAM标上AMO-21s，接着随后将标上的AMO-21s电进入外泌体中，外泌体身用DiI展开刺绣。将此配载后的外泌体与C6组织受损体细胞共培育24h，用共凝聚体视显微镜和流式受损体细胞组织受损体细胞仪评估报告AMO-21传承速率。結果展现，T7-exo传承AMO-21s的速率超过Unmod-exo和RVG-exo，与此同时用RT-PCR验测C6组织受损体细胞中的miRNA-21总体水平也检验了AMO-21s的传承速率（Fig.3）。

Fig.3 体外分析RVG和T7修饰外泌体装载AMO-21s后的传递效率

MTT测量导致情况说明经RVG和T7绘制后的外泌体对C6細胞的话力基本上不影向，而加了PEI25K组的C6細胞只能是之前话力的80%。用外泌体和PEI25K除理红細胞，也出现PEI25k组中红細胞有较为严重的密集和裂解症状，其知他组与差表组相同，不存在显眼的密集和溶血症状。

Fig.4 外泌体的生物相容性观察

3.T7-exo靶向脑部的传递效率

将Dil箭头的外泌体利用尾血管针剂入大鼠中，会发现T7-exo在脑干比某些外泌体有更强的表现，这表示T7-exo就可以可行地表达AMO-21到脑干。很快将Cy5箭头的AMO-21s放进Unmod-exo、RVG-exo和T7-exo中，再将他们外泌体分别是IV针剂入SD大鼠中。脑干表现结局提示，脑袋中T7-exo递送AMO-21s的生产率比Unmod-exo、RVG-exo高；除此之外，内脏器官和肾脏也具有着较高的AMO-21表现。

WB的结果表示，外泌体上T7配体的量短于RVG配体的量，而且T7-exo的分享高效率高与RVG-exo，这也发现了T7是比RVG更可以有效的靶向治疗大脑的配体。

 

Fig.5 RVG-exo和T7-exo在体内传递到大脑的效率
 

4.装载AMO-21s的外泌体在脑瘤动物模型中的治疗效果

将装车了AMO-21s的外泌体填充入脑瘤動物建模方法中，判断到RVG-exo和T7-exo介导的AMO-21s能有用减轻脑袋的miR-21平均水平，这取决于了RVG和T7配体或者延长了外泌体向脑袋的靶向药物运输物流。

Fig.6 体内递送AMO-21s后对miR-21水平影响
 

外泌体递送AMO-21s的进行治疗方法视觉作用也可使用PDCD4和PTEN横向来考评。为此PDCD4和PTEN蛋白酶在胶质母上皮组织瘤中调高上皮组织阶段和凋亡，为此PDCD4和PTEN的上浮与AMO-21的进行治疗方法视觉作用想关。最终结果取决于，与某些的载体和外泌体差距，T7-exo递送AMO-21s能更很好地增长PDCD4和PTEN的表答横向（Fig.7）。

Fig.7 免疫染色结果

 

大鼠在预防接种癌肿肿癌神经细胞13日后被处死，此外论文检测癌肿的的长宽比和建筑面积。可是阐明，T7-exo/AMO-21s能能够地降低癌肿，且肌注液体了RVG-exo/AMO-21和T7-exo/AMO-21的两两癌肿的长宽比还不了对应组癌肿的长宽比的半页。随着将小药量的T7-exo/AMO-21位置定位肌注液体入胶质母肿癌神经细胞瘤大鼠模特中，可是显视，当实用T7-exo将约42 ng的AMO-21会直接递送入癌肿位置时，癌肿的的长宽比降低了（Fig.8）。

Fig.8 AMO-21的抗肿瘤效果

 

总结怎么写

在本科研中，T7肽评为价为有一种新的靶点配体，用在外泌体介导的AMO-21向胶质母細胞瘤的交换。胶质母細胞瘤的身体外科研和原位胶质母細胞瘤建模方法的内科研说明，T7-exo比RVG-exo、Unmod-exo和PEI25k对脑胶质母細胞瘤有越高的AMO-21交换率。